Mikrobno znanje, ki ga želite
Mikroorganizmi so skupina drobnih organizmov, ki so razširjeni v naravi in so s prostim očesom nevidni in jih je treba s pomočjo optičnega mikroskopa ali elektronskega mikroskopa povečati sto, tisočkrat ali celo desettisočkrat. Njihove prednosti so majhna velikost, preprosta zgradba, hitro razmnoževanje, enostavno spreminjanje in močna sposobnost prilagajanja okolju.
Razvrstitev mikroorganizmov:
Obstaja veliko vrst mikroorganizmov, vsaj več kot 100000 vrst. Glede na njihovo strukturo, kemično sestavo in življenjske navade ter druge razlike lahko razdelimo v tri kategorije.
Jedro evkariontske mikrobne celice ima višjo stopnjo diferenciacije, vključno z jedrsko membrano, nukleolom in kromosomi; citoplazma ima popolne organele (kot so endoplazmatski retikulum, ribosom in mitohondriji itd.). Glive spadajo v to vrsto mikroorganizmov.
Prokariontske mikrobne celice imajo nizko stopnjo jedrske diferenciacije, samo primitivno nukleoplazmo, brez jedrske membrane in nukleola; organeli niso zelo popolni. Obstaja veliko vrst takih mikroorganizmov, vključno z bakterijami, spirohetami, mikoplazmo, rikecijami, klamidijami in aktinomicetami.
Acelični mikroorganizmi nimajo značilne celične strukture in encimskega sistema za ustvarjanje energije ter lahko rastejo in se razmnožujejo samo v živih celicah. Virusi pripadajo tej vrsti mikroorganizmov.
Ločevanje in čiščenje mikroorganizmov
Mikrobna kultura, ki vsebuje več kot eno vrsto, se imenuje mešana kultura. Če vse celice v koloniji izhajajo iz ene starševske celice, se kolonija imenuje čista kultura. Pri identifikaciji bakterijskih vrst se običajno zahteva, da so uporabljeni mikroorganizmi čiste kulture. Postopek pridobivanja čiste kulture se imenuje separacija in čiščenje, metod pa je veliko.
1. Metoda nalivne plošče
Najprej se mikrobna suspenzija razredči v nizu in določena količina razredčitve se popolnoma zmeša z raztopljenim hranilnim agarnim medijem, ki se vzdržuje na približno 40-50 stopinjah, nato pa se zmes vlije v sterilno petrijevko. Po strjevanju smo ploščo inkubirali obrnjeno navzdol v konstantni komori. Posamezna celica se pomnoži, da nastane kolonija, ena sama kolonija se vzame za pripravo suspenzije in zgornji koraki se večkrat ponovijo, da se pridobi čista kultura.
2. Metoda premazovanja ploščate plošče
Mikrobno suspenzijo najprej ustrezno razredčimo in določeno količino razredčine nanesemo na sterilno strjeno ploščo s hranilnim agarjem, nato pa razredčino s sterilno stekleno spatulo enakomerno razporedimo po površini gojišča. Z inkubacijo pri konstantni temperaturi lahko pridobimo eno samo kolonijo.
3. Metoda vrezovanja plošč
Mikroorganizme najlažje izoliramo s črtanjem. S sterilno zanko nanesite majhno količino kulture na ploščo. Obstaja veliko načinov pisanja. Običajne metode vpisovanja, pri katerih obstaja večja verjetnost, da bodo prikazale eno samo kolonijo, so metoda poševnice, metoda krivulje, kvadratna metoda, metoda sevanja in metoda štirih mrež. Ko se inokulacijska zanka premakne nazaj po površini gojišča, se bakterijska tekočina na inokulacijski zanki postopoma razredči in končno se na narisani črti razprši ena celica. Po gojenju vsaka celica zraste v kolonijo.
4. Metoda obogatitvene kulture
Metoda in princip metode obogatitvene kulture sta zelo preprosta. Ustvarimo lahko pogoje, ki omogočajo rast le želenim mikrobom, pod temi pogoji pa lahko želeni mikrobi učinkovito tekmujejo z drugimi mikrobi in daleč presegajo druge mikrobe glede sposobnosti rasti. Če želimo izolirati nekatere obligatne parazite, je treba vzorce inokulirati v ustrezne dovzetne populacije gostiteljskih celic, da rastejo v velikem številu. Čiste parazitske bakterije lahko pridobimo s ponavljajočim sejanjem.
5. Anaerobna metoda
V laboratoriju lahko za izolacijo nekaterih anaerobnih bakterij kot posodo za kulturo uporabimo epruveto, ki vsebuje originalni gojišče, in epruveto lahko nekaj minut segrevamo v vreli vodni kopeli, da izločimo raztopljeni kisik v mediju. . Nato se hitro ohladi in inokulira. Po inokulaciji smo na površino gojišča dodali sterilni parafin, da smo gojišče izolirali od zraka. Druga metoda je zamenjava plina v mediju z N2 ali CO2 po inokulaciji in nato zatesnitev ustja epruvete nad plamenom. Včasih je mogoče za učinkovitejšo izolacijo nekaterih anaerobnih bakterij izolirani vzorec nacepiti na gojišče, nato pa petrijevko postaviti v popolnoma zaprto napravo za anaerobno kulturo.
6. Metoda izolacije posamezne celice (ali posamezne spore).
Za neposredno izolacijo posameznih celic ali posameznih posameznikov iz mešanih populacij za gojenje, da dobimo čisto kulturo, je treba uporabiti metodo mikroseparacije. Pri večjih mikroorganizmih lahko s kapilaro ekstrahiramo enega posameznika. Za mikroorganizme z relativno majhnimi posamezniki je potreben mikromanipulator, ki pod mikroskopom pobere posamezne mikrobne celice ali spore s kapilarno ali mikroiglo, kavljem, zanko itd., da dobi čisto kulturo. Metoda enocelične separacije ima razmeroma visoke zahteve glede tehnologije delovanja.
Mikrobna kultura
1. Glede na to, ali je med kulturo potreben kisik, jo lahko razdelimo v dve kategoriji: aerobno kulturo in anaerobno kulturo.
Aerobna kultura: znana tudi kot "aerobna kultura". Se pravi, ko ta mikroorganizem gojimo, mu je treba dodati kisik, sicer ne bo dobro rasel. V laboratoriju se poševne kulture pridobivajo s pridobivanjem sterilnega zraka od zunaj skozi vatirane čepke. Večino tekoče kulture v erlenmajerici stresamo s stresalnikom, tako da lahko zunanji zrak neprekinjeno vstopa v steklenico.
Anaerobna kultura: znana tudi kot "anaerobna kultura". Takšni mikroorganizmi ne potrebujejo kisika za sodelovanje pri gojenju. V procesu gojenja anaerobnih mikroorganizmov je najpomembnejša odstranitev kisika v mediju.
2. Glede na fizično stanje medija ga lahko razdelimo v dve kategoriji: trdno kulturo in tekočo kulturo.
Trdna kultura: Gre za metodo inokulacije sevov v ohlapno in s hranili bogato trdno gojišče ter gojenje mikroorganizmov v ustreznih pogojih.
Tekoča kultura: V poskusih lahko tekoča kultura povzroči hitro razmnoževanje mikroorganizmov in pridobitev velikega števila kultur. Pod določenimi pogoji je tudi učinkovita metoda za mikroorganizme, da izberejo in obogatijo bakterije.
BKMAM biotech zagotavlja ustrezen laboratorijski potrošni material za mikrobne kulture:
Plastične okrogle/kvadratne petrijevke za enkratno uporabo:
lVisoko prosojni polistirenski material (PS);
lPovršina je gladka in ravna in ni optičnega popačenja celic pod mikroskopom;
l Zasnova zlaganja olajša zlaganje in shranjevanje;
l Sterilizacija z etilen oksidom (EO);
l Odpornost proti obrabi in koroziji.
Plastična palica/zanka za enkratno uporabo:
Polistirenski material (PS);
Proti onesnaževanju, brez endotoksinov, DNaze, RNaze in pirogenov;
Neodvisna embalaža je bila sterilizirana;
Fina izdelava in popolne specifikacije;
Plastični trosilnik celic za enkratno uporabo, trosilnik bakterij:
Polistirenski material (PS);
Proti onesnaževanju, brez endotoksinov, DNaze, RNaze in pirogenov;
Oblika v obliki črke L, enostavna za uporabo;
Za enkratno uporabo, lahek in priročen.
Sterilne plošče s specifikacijami iz nerjavečega jekla/za enkratno uporabo:
Tablica s specifikacijami iz nerjavečega jekla je izdelana iz nerjavečega jekla, ploščica s specifikacijami za enkratno uporabo pa iz polipropilena (PP), primernega za živila.
Proti onesnaževanju, brez endotoksinov, DNaze, RNaze in pirogenov;
Območje mazanja je strogo standardizirano
Ena stran tablice s specifikacijami je opremljena z ročajem, ki je enostaven za uporabo
Sterilno zaprt posamezen paket, da se izognete sekundarni kontaminaciji vzorčenja in napakam v rezultatih
Enkratna uporaba za preprečevanje navzkrižne kontaminacije in zmanjšanje delovne obremenitve
Vabljeni k sodelovanju z nami
S spoštovanjem
Michael Peng
michael@bkmbio.com
