ELISA s slabim rezultatom?Spremljajte nas, da izberete pravi krožnik Elisa.
Izbira primerne plošče ELISA je prvi korak k uspešnemu poskusu ELISA, vendar mnogi ljudje to ignorirajo. Ko ljudje izvajajo eksperimente, pogosto upoštevajo le eksperiment sam, ne vedo pa, da ima izdelek pogosto velik vpliv na eksperiment. Pravilna izbira izdelkov bo pripomogla k uspehu poskusa. Pri izvajanju poskusov ELISA običajno upoštevamo naslednje dejavnike:
1. Oblika dna
Trenutno proizvajalci načrtujejo vdolbinice, označene z encimi, kot neodvisne kolone in ustrezno povečajo razdaljo med vdolbinicami, da jih je mogoče ločiti neodvisno, s čimer zmanjšajo navzkrižno kontaminacijo. Različne vrste plošč Elisa imajo različne oblike dna vodnjaka. Tukaj je nekaj običajnih oblik dna lukenj:
Ravno dno: Dno je vodoravno, imenovano tudi F dno. Svetloba se ne bo odbijala skozi dno, ki lahko v največji meri prepušča svetlobo. Uporabite za poskuse, ki zahtevajo okroglo dno zaradi vidljivosti ali drugih razlogov.
Okroglo dno: Znano tudi kot U-dno, zagotavlja najboljše rezultate čiščenja in hibridno zmogljivost, primerno za aplikacije, ki potrebujejo testiranje usedlin.
C-dno: lahko zagotovi dober učinek čiščenja med ravnim dnom in okroglim dnom, hkrati pa združuje prednosti ravnega dna.
Stožčasto dno: znano tudi kot V-dno, je primerno za natančno vzorčenje in shranjevanje mikro vzorcev za optimalno pridobivanje majhnih količin.
2. Barva plošče Elisa
Plošča Elisa je v treh barvah: prozorna, črna in bela.
Večina ELISA izbere prozorne plošče kot eksperimentalni material. Bele in črne plošče Elisa se običajno uporabljajo za detekcijo luminiscence. Črna ELISA plošča sama absorbira svetlobo, zato je njen signal šibkejši kot pri beli ELISA plošči. Črne plošče Elisa se običajno uporabljajo za zaznavanje močnejše svetlobe, kot je zaznavanje fluorescence; ravno nasprotno, bele plošče Elisa se lahko uporabljajo za šibkejše zaznavanje svetlobe in se pogosto uporabljajo za splošno kemiluminiscenco in razvoj barve substrata (kot je dvojna luciferaza). analiza reporterskega gena).
3. Material plošče Elisa
Pogosti materiali so polietilen (PE), polipropilen (PP), polistiren (PS), polivinilklorid (PVC) in polikarbonat (PC).
Najbolj razširjena materiala v ELSIA sta polistiren in polivinilklorid. Polivinilkloridna mehka plošča je tanka, rezljiva, cena pa je nizka. Pomanjkljivost je, da zaključek ni tako dober kot polistirenska plošča in dno luknje ni tako ravno kot polistiren. Povečala pa se bo tudi ustrezna vrednost ozadja. Običajno se obdelava z ionskim cepljenjem izvede na površini plošče ELISA in aktivne funkcionalne skupine, kot so aldehidne skupine, amino skupine in epoksi skupine, se vnesejo v polimerno površino, da se izboljša učinkovitost površine substrata.
4. različni mehanizmi vezave
Učinkovita vezava materiala prevleke na spodnjo površino plošče je ključni korak pri testu ELISA. Zato je treba pred poskusom skrbno analizirati strukturne značilnosti in kemijske lastnosti snovi, ki jo je treba premazati, da se izbere ustrezna plošča Elisa. Na splošno obstaja več načinov vezave materiala prevleke na dno plošče: pasivna adsorpcija, kovalentna vezava in zajem afinitete.
Pasivna adsorpcija: Mehanizem pasivne adsorpcije je kompleksen, vezava med materialom prevleke in dnom plošče pa temelji predvsem na medmolekularnih silah (van der Waalsova sila) in vodikovih vezeh. Pri večini testov ELISA je vezava prevleke na dno plošče dosežena s pasivno adsorpcijo. Na splošno se vezava med antigeni srednje in velike molekulske mase (ali protitelesi) in dnom plošče doseže s pasivno adsorpcijo. Pri izbiri plošče Elisa se pogosto upoštevajo hidrofobne/hidrofilne lastnosti spodnje površine plošče. Naslednja tabela navaja obseg uporabe in uporabo različnih hidrofilnih substratnih površin:
hidrofilne | Prednostna vezava | Glavna uporaba |
- | Molekule, ki vsebujejo pomembne hidrofobne regije, kot so: lipidi, lipoproteini, veliki proteini | Antigen ELISA, FlA, LIA |
plus | Biomolekule s hidrofilnimi/hidrofobnimi lastnostmi, kot so: srednje veliki do veliki proteini, imunoglobulini, albumin | Double Antibody Sandwich ELISA, antigen ELISA |
plus plus | Biomolekule s hidrofilnimi/hidrofobnimi lastnostmi, kot so: majhni do veliki proteini, imunoglobulini, albumin, LPS, fosforilirani proteini, glikoproteini | Dvojna protitelesa ELISA, FIA, LIA |
plus plus plus | Glikoproteini, polarne lipidne molekule, fosfolipidi, kardiolipidi | Antigen ELISA |
Zajem afinitete: Zajem afinitete temelji na specifični vezavi označenih makromolekul na njihove ustrezne receptorje. Označene makromolekule je mogoče pridobiti s kemičnim spajanjem ali z genskim inženiringom.
Funkcije Affinity Capture so:
1.visoka specifičnost
2. Lahko izboljša razmerje med signalom in šumom rezultatov meritev
Pogostejše površine dna vodnjaka so: površina, prevlečena s streptavidinom (streptavidin); površina, prevlečena z nikljevim kelatom (Nickel Chelate), in površina, prevlečena z glutationom (Glutation, GSH).
3. Površina streptavidina: visoka afiniteta in specifičnost streptavidina in biotina se uporabljata za realizacijo vezave spodnje plošče na prevlečeni protein.
4. Površina nikljevega kelata: kelat niklja je pritrjen na površino polimera, da veže fuzijske proteine s Hisovimi (histidinskimi) oznakami.
5. Površina glutationa: uporaba specifičnosti encima in substrata med glutationom in glutation sulfhidriltransferazo (GST), da se doseže vezava spodnje plošče na beljakovino plašča.
Zakaj izbrati ploščo BKMAM Elisa?
Izdelano iz 100-odstotnega polistirenskega materiala,
Primerno za adhezivno celično kulturo,
Ravna podlaga, enakomerna debelina in enotna velikost za reakcijske drogove,
Sterilno z individualno embalažo,
Visoka kakovost s tovarniško ceno.
